Annexe Française

NE JAMAIS ETEINDRE LE FERMENTEUR ET ENCORE MOINS ENLEVER LA CARTE !!!

 ** Pour vous aider, des cases à cocher ont été prévues.

1. MISE EN PLACE DU FERMENTEUR :

   	(1) Le fermenteur a été autoclavé par l’utilisateur précédent, il est donc prêt à être utilisé. Le positionner sur le socle en inox de l’antenne. Resserrer le collier qui tient le couvercle du fermenteur en vissant. Photos 01 02 03 ATTENTION ! Ne pas insérer de papier entre la cuve et le socle, car risque de mauvais fonctionnement.
   	(2) Faire le branchement des tuyaux arrivée et sortie d’eau (vessel in et out) entre l’antenne et la cuve. Ces branchements correspondent à l’alimentation en eau de la double enveloppe. Si difficultés à faire les branchements, mettre un peu de glycérol sur les joints d’étanchéité de ces branchements. Photos 04 05
   	(3) Ne pas oublier de brancher le tuyau qui correspond au « trop-plein » de la double enveloppe. Ce branchement va à l’évier. Photos 06 07
   	(4) Brancher les tuyaux arrivée et sortie d’eau au niveau du condensateur. Au niveau du condensateur, la sortie d’air doit être reliée à un tuyau allant dans un bécher avec de la soude. Photos 08 09 10 11 12 13
   	(5) Relier l’arrivée d’air (tuyau blanc provenant de la droite de la colonne) à la cuve (au niveau du filtre). Photos 14 15 16
   	(6) Brancher la sonde température (câble rouge). Repère pour le branchement. Photo 17
   	(7) Brancher les sondes pO2 et pH le plus tôt possible, car temps de polarisation des sondes ~ 30 minutes. Les sondes pH et pO2 sont à recalibrer après passage à l’autoclave, car autoclave modifie la pente de polarisation. (cf annexe calibration) Photo 17 Rq : Si cela n’est pas impératif, ne pas autoclaver les sondes à chaque utilisation (toutes les deux/trois utilisations).
   	(8) Brancher la sonde « CellD » aussitôt que possible pour la polariser. Photos 18 19 20 21 La calibration de la sonde (le « zéro ») se fait quand le milieu est dans la cuve : sur boîtier à part, basculer le bouton « auto zéro » sur ON. La valeur affichée est maintenant de 0,00.
   	(9) Enfin, brancher l’engrenage du moteur (au centre du fermenteur). Photos 22 23 24
   	(10) Pour ce qui est des bouteilles devant contenir les solutions acide/base ou feeding, après avoir transféré les solutions stérilisées dans ces bouteilles, déclamper les tuyaux et amorcer les pompes. L’amorçage des pompes permet de vérifier que le tuyau est bien mis au niveau de la pompe péristaltique et que les solutions sont bien aspirées. Photos 25 26 27 Conseil : Il est important d’amorcer les pompes jusqu’à ce que les solutions soient à l’entrée du bouchon triple, ainsi on aura une bonne indication des volumes d’acide/base ou feeding utilisés.
   	(11) Une fois tous les branchements faits, ouvrir robinet d’eau et alimentation en air. S’assurer que le manomètre laisse bien de l’air sortir.
   	(12) Remplir la cuve avec le milieu si celui-ci n’est pas déjà dedans puisque autoclavé in situ.

    

2. DEBUT DE LA FERMENTATION :

   1. Vérification au niveau de la colonne :

      	(13) « fermenter menu » sous-menu 1. « start/stop » : Il est impératif de vérifier que tous les paramètres que l’on veut contrôler sont sur « ON » (stirrer, température, pH, pO2), car aucune possibilité d’intervenir pendant la fermentation. ESC -escape- pour revenir au menu fermenteur.
      	(14) Conseil : Dans le menu 4. « Pump Flow setting », mettre les paramètres acid pump, base pump, AF et feed sur « OFF » de façon à ne pas avoir des ajouts de base ou d’acide dès le démarrage du fermenteur et se laisser ainsi le temps de rentrer les set point pour le pH, la pO2… Mettre flow out sur AUTO.
      	(15) Vérifier dans le menu 0. « pO2 Control Def » que le contrôle de la pO2 se fait sur les deux niveaux : contrôle par airflow et/ou par stirrer.

       

      Une fois que tout cela est fait, le démarrage du fermenteur se fait par le logiciel IRIS.

       

   2. Démarrage de la fermentation à partir d’IRIS:

   Sur la page accueil du pc, icône « IRIS ».

   Message d’erreur, OK.

   (16) Aller dans le menu « parameters » afin de s’assurer que tous les paramètres dont on va avoir besoin pendant la fermentation existent que ce soit des paramètres calculés, analysés… Il est important que les paramètres tels que ceux correspondant à l’acide pump ou à la base pump soient calibrés : « parameter » option « edit » du paramètre choisi, rentrer la maximum value : 250 ml par exemple. NE RIEN CHANGER D’AUTRE !!!

   (17) Cliquer sur « file », puis « new (start fermenter)» : · Sélectionner le fermenteur : « Labfors »…, « suivant ». · Entrer le titre de votre fermentation. Laisser la phase initiale en « innoculation », « suivant ». · Sélectionner les paramètres que l’on veut utiliser voire contrôler pendant la fermentation (sélection individuelle ou « select all »), « suivant ». · Dans la dernière fenêtre, « batch file… ». Ne rien écrire et cliquer sur « Terminer ».

    

   A ce moment là, tout se met en route : le remplissage de la double paroi, l’agitation, le chauffage du milieu…

   Il est alors temps de rentrer les set points de tous les paramètres en double cliquant sur l’affichage.

    

   Problème rencontré 1 : Le niveau d’eau dans la double enveloppe est souvent après le passage à l’autoclave inférieur à ce qu’il devrait être.

   Dans le cas normal, le fermenteur va corriger cela dès que la fermentation commence. Mais parfois, le remplissage ne se fait pas ou a du mal à se faire.

   Dans ce cas, il y a deux solutions : soit les connections cuve/colonne sont mal enclenchées, donc il faut essayer de les réenclencher…, soit le fermenteur estime que la température est correcte par rapport à son set point, donc une circulation d’eau n’est pas nécessaire. Dans cet autre cas, il faut tricher en lui indiquant un set point avec une température plus basse et donc il va enclencher la circulation d’eau dans la double enveloppe pour refroidir le milieu, ce qui va permettre le remplissage.

   Problème rencontré 2 : Si l’agitation ne se met pas en route, vérifier que le set point n’est pas égal à zéro rpm, sinon aller sur la colonne dans le menu 0. « pO2 control def » et vérifier que la valeur « max infl » n’est pas trop grande : on donne ~200 rpm.

   	(18) Afin de mieux visualiser les variations des paramètres de la fermentation, cliquer sur l’icône représentant un graphique.
   	(19) Au moment de l’INNOCULATION, cliquer sur l’icône représentant une seringue. L’heure enregistrée à cet instant correspond au to de la fermentation.
   	(20) Ne pas oublier de retourner dans « fermenter menu », menu 4. « pump flow setting » afin de mettre sur AUTO l’acid pump ou la base pump selon si le milieu tend à s’alcalaniser ou à s’acidifier. Valider cette commande en tapant sur « enter ».

    

    

3. FIN DE LA FERMENTATION :

   Pour arrêter la fermentation, cliquer simplement sur la croix comme pour fermer la fenêtre du programme.

   A ce moment là, un message va apparaître : « closedown fermentor » « yes or no ».

   En cliquant sur yes, le fermenteur va s’arrêter. Vous pouvez alors procéder au démontage et à la récolte de votre culture.

    

4. NETTOYAGE DU FERMENTEUR :

   Il est important de bien nettoyer le fermenteur ainsi que les différents accessoires.

   NE PAS UTILISER DE JAVEL !!!

   Il est possible d’utiliser un peu de détergent, mais dans ce cas le rinçage est très important et doit être bien fait.

   Les tuyaux en plastique reliant les bouteilles contenant les solutions doivent être bien nettoyés avant l’autoclave.

    

5. PREPARATION DU FERMENTEUR POUR L’AUTOCLAVE :